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本试剂盒细胞增殖检测是一个基于荧光检测的实验，可以监测细胞健康和通过胸苷掺合来估量DNA合成从而监测细胞分裂。

BrdU(5-溴代-2'-脱氧尿苷，溴脱氧尿苷)是一种合成的核苷酸即胸苷的类似物。BrdU通常被用于检测活组织中再生的细胞。BrdU可以掺合到复制细胞中新的合成DNA中(在细胞周期S期)，在DNA复制可代替胸苷。利用抗BrdU的特异性抗体便可以用于检测这个插入的化学品，从而检测出细胞是否在复制其DNA。

1. 仪器：微量移液器、低速离心机、平板摇床、微量移液器、流式细胞仪、1.5mL Microtube
   
2. 试剂：
   
   1. BrdU (5-溴代-脱氧尿苷，货号：KFS599)
      
   2. 2%多聚甲醛固定液
      
   3. 0.125%胰酶消化液
      
   4. 10mM PBS,pH7.5

1. 细胞处理步骤：
   
   1. 在最适的环境下培养细胞(细胞密度在临界对数生长期)加入BrdU至终浓度为30μM.孵育30～60分钟。
      
   2. 吸去培养基，PBS洗一次。
      
   3. 0.125%胰蛋白酶消化5～15分钟。
      
   4. 收集细胞方法见BrdU标记步骤中所示。
2. BrdU标记步骤：
   
   1. 收集细胞：1000g，10min收集细胞，以每管500μL洗涤液重悬离心洗涤2次，调整细胞数在10⁵～10⁶/管。
      
   2. 固定：每管加入500μL固定液重悬细胞，4度固定过夜，以每管500μL洗涤液离心洗涤2次，1000g，10min。
      
   3. 通透：每管加入500μL通透液重悬细胞，冰上孵育2分钟，以每管500μL洗涤液离心洗涤2次，1000g，10min。
      
   4. DNA变性：以300μL DNA变性工作液(计算每次反应所需要的变性工作液总量后，以每300μL变性缓冲液加入50μL变性剂混匀后，4℃放置待用)重悬细胞，37度反应30min，以每管500μL洗涤液离心洗涤2次，1000g，10min。
      
   5. BrdU标记：以195μL染色缓冲液重悬细胞，加入PE-BrdU抗体5μL(0.125μg)/每管，4度避光孵育30min。上流式仪检测，488nm激发波长，575nm发射波长。